期刊简介
《当代医学》杂志是国家卫生健康委员会主管，中国医师协会主办的国家级综合性医学学术期刊。1994年4月创刊，旬刊。国际标准刊号ISSN1009-4393，国内统一刊号：CN11-4449/R，国内邮发代号：82-829。本刊被万方、知网、维普、中邮阅读网等数据库收录。曾获卫生部医药卫生优秀期刊奖。
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- 杂志名称：当代医学杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中国医师协会
- 国际刊号：1009-4393
- 国内刊号：11-4449/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：曾获卫生部医药卫生优秀期刊奖期刊收录：万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中)
TRPV1基因的shRNA逆转录病毒载体的构建和鉴定
琚幼婷；卢俊；胡衍辉；陈受琳；蔡俊赢；李昌
关键词：瞬态电压感受器阳离子通道, 利多卡因, 逆转录病毒
摘要：目的：构建针对人瞬态电压感受器阳离子通道，子类V，成员1(TRPV1)基因的pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒表达载体，感染U87-MG细胞，观测其沉默TRPV1基因的效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人TRPV1基因的shRNA干扰序列，克隆到pSUPERretro-puro载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用磷酸钙法制备pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒，将其感染到U87-MG细胞，经嘌呤酶素筛选阳性克隆后采用荧光定量PCR及Western blotting法检测TRPV1表达。结果经DNA测序和酶切鉴定表明，pSUPERretro-puro TRPV1表达载体构建成功。pSUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后，细胞中TRPV1表达量明显降低。结论成功构建了针对人TRPV1基因的pSUPERretro-puro TRPV1表达载体。pSUPERretro-puro TRPV1能有效下调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达，为将来应用其研究TRPV1在利多卡因致细胞损伤中的作用奠定了基础。
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