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  • 杂志名称:当代医学杂志
  • 主管单位:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:中国医师协会
  • 国际刊号:1009-4393
  • 国内刊号:11-4449/R
  • 出版周期:旬刊
期刊荣誉:曾获卫生部医药卫生优秀期刊奖期刊收录:万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中)
当代医学杂志2013年第29期

肺炎支原体MPN 668蛋白的克隆和表达与纯化

陈列松;游晓星;刘良专;曾焱华;吴移谋

关键词:肺炎支原体, MPN668, 融合蛋白
摘要:目的:克隆表达与纯化肺炎支原体mpn 668蛋白。方法以Mp 129株基因组DNA为模板,PCR法扩增目的基因mpn 668,将其亚克隆至pGEX-6 P-1载体中。经鉴定后将其转化至表达菌E.coli BL 21中进行诱导表达。采用SDS-PAGE和蛋白质印迹等方法对表达产物进行分析鉴定并纯化GST融合蛋白。结果成功扩增出总长度为423 bp的mpn 668基因,所构建的原核重组质粒经PCR、双酶切以及测序鉴定与预期目的基因相符。SDS-PAGE显示,IPTG可诱导一分子量约为41 kD的可溶性GST融合蛋白,经GST·BindTM Purification Kit纯化后,纯度可达95%以上。结论本研究成功克隆表达出mpn 668融合蛋白,为下一步研究其功能奠定了基础。